流式課堂Caspases活性檢測(cè)常見問題分析及解決方案
發(fā)布時(shí)間:
2023-05-16
本文我們將對(duì)程序性死亡的三種類型即細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死、細(xì)胞焦亡做一個(gè)簡單的總結(jié),并著重介紹在凋亡和焦亡過程中發(fā)揮重要作用的Caspase家族,以及Caspase酶活性檢測(cè)(分光光度法)常見的問題和解決方案。
我們先來簡單回顧下Caspases白酶家族參與的細(xì)胞凋廣和焦廣的相關(guān)內(nèi)容·
接下來,我們來了解下Caspases白酶家族的成員,Caspases半胱氨酸蛋白酶家族作為程序性細(xì)胞死亡信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)控環(huán)節(jié),發(fā)揮著舉足輕重的作用。
細(xì)胞凋亡的過程實(shí)際上是Caspase被活化并發(fā)揮凋亡蛋白酶的酶切功能的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Caspases蛋白酶家族存在于胞漿中,它們同源性很高,結(jié)構(gòu)相似,均含有一個(gè)半胱氣酸激活位點(diǎn),特異地?cái)嚅_天冬氨酶殘基后的肽鍵,目前被發(fā)現(xiàn)的Caspases有14種,哺乳動(dòng)物Caspases白酶家族根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能,可以分為三大類:
Casnasespe細(xì)胞中常常以酶原的形式存在,不具有即切活性,被激活后以前切體的形式存在,本文著審介紹體用海標(biāo)通行Caspases活性檢測(cè)試劑盒(分光光度法)檢測(cè)Caspases活性體的方法,其原理主要是基于Caspases可以催化特異性底物Ac-XXXD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收,從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)Caspases的活性。
主要原理圖如下所示:
Caspase性檢測(cè)試劑盒(吸光法)的檢測(cè)流程主要包括樣本的前處理、樣本的裂解、酶活的檢測(cè)三大塊,針對(duì)該檢測(cè)流程,匯總了以下常見問題和解決方法:
樣本前處理過程中存在的問題和解決辦法
樣本裂解過程中存在的問題和解決辦法
樣本檢測(cè)過程中存在的問題和解決辦法
其他因素引起的問題和解決辦法
綜上所述,細(xì)節(jié)決定成敗,把各個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)的細(xì)節(jié)把控到位,Caspases活性檢測(cè)(吸光法)就可以萬無一失,獲得最準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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