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細胞代謝測定實驗常見問答
發布時間：
2023-05-16
吸棄培養液，用冷的PBS(0.01 M，pH 7.4)輕輕將細胞洗一遍，然后用胰蛋白酶消化或細胞刮收集細胞，加入2-5 mL PBS(0.01 M，pH 7.4)，制成細胞懸液，4°C，1000×g離心5分鐘后收集細胞。
1 貼壁細胞如何收集?
吸棄培養液，用冷的PBS(0.01 M，pH 7.4)輕輕將細胞洗一遍，然后用胰蛋白酶消化或細胞刮收集細胞，加入2-5 mL PBS(0.01 M，pH 7.4)，制成細胞懸液，4°C，1000×g離心5分鐘后收集細胞。
2 收集貼壁細胞時，可以用胰酶消化嗎?
可以使用胰酶消化細胞，也可以用細胞刮刮下細胞。
3 如何進行細胞計數
細胞計數方法常見的有血球計數板，流式細胞儀或自動化的細胞計數器/儀，可根據實驗室的設備選擇合適的方法
4 細胞樣本暫時不測，如何保存?
細胞樣本若暫時不測定，可低溫凍存，避免反復凍融。一般-20℃可保存半個月，-80℃可保存1個月。特殊指標對樣本有較高要求除外。制備好的細胞勻漿最好當天進行測定。
5 細胞樣本勻漿是什么意思?勻漿的方式有哪些?
勻漿是指將細胞，加入特定溶液后，通過某種方式進行充分混勻，均質化。細胞常見的勻漿方式有以下幾種：
a. 手工勻漿：收集一定數量的細胞，加入勻漿介質，左手持勻漿管將下端置于冰浴中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次(5～8 min)，使細胞充分勻漿;或者倒入研缽中，加入液氮進行研磨，充分研磨后，加入勻漿介質，再將制好的勻漿液吸取到EP管中備用。
b. 機械勻漿：將樣本裝入EP管，加入勻漿介質，用勻漿機，在低溫條件下，60 Hz，90 s研磨制成細胞勻漿
c. 超聲破碎：用超聲波發生器以振幅14 μm超聲處理30 s，使細胞破碎;或者用超聲細胞破碎儀，200 W，2 s/次，間隙3 s，總時間5 min。
d. 反復凍融：用勻漿介質重懸細胞，再將細胞懸液進行“冷凍-融化-冷凍”循環，具體如下：將其-80℃放置1小時/液氮放置0.5小時，然后置于30℃水浴鍋中輕微振蕩使其迅速融化，重復3次左右。此法會使某些酶活力受影響，因此檢測細胞樣本的酶活力時不推薦使用反復凍融來破碎細胞。
6 細胞樣本可以使用裂解液處理嗎?
由于代謝測定試劑盒的基本原理是基于化學反應，而裂解液中的成分相對比較復雜，可能會有成分對試劑盒的反應產生干擾，所以不建議使用自己的裂解液處理樣本。Elabscience為了提高客戶實驗的簡便性，開發了針對特定試劑盒適用的裂解液(E-BC-L001、E-BC-L002)，可與試劑盒搭配使用。
7 細胞樣本檢測時，需要對樣本進行稀釋嗎?
一般對于大部分的指標，細胞樣本不需要稀釋。但考慮到樣本差異、造模等因素的影響，建議在正式實驗前選2-3個樣本進行預實驗，以確定是否需要稀釋以及合適的稀釋倍數。
8 為什么有些指標測定細胞樣本時，還需要測定樣本的蛋白濃度?
一般測細胞樣本時要先進行勻漿處理，勻漿的程度不一樣釋放的蛋白也不一樣，測蛋白就是為了校正勻漿破碎的程度。
9 為什么測定細胞樣本時，顯色很淺或幾乎沒有顏色?
可能是細胞樣本中該指標的含量比較低，通過肉眼無法觀察到明顯的顏色，但是通過儀器是可以檢測到的。
10 細胞樣本測值很低，和空白差異不大，應該如何調整?
可能是細胞中該指標的含量比較低，可以通過增加細胞濃度試試，增加細胞量或者減少勻漿介質的加入量(需超過最低上樣量體積)，如有疑問可以咨詢技術支持。
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