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如何計算代謝檢測的結果
發布時間：
2023-05-16
代謝檢測是一種利用化學反應，對生物代謝過程中的各種產物和酶進行檢測的方法。其主要的檢測目標包括糖類、脂質、有機小分子、無機離子、蛋白質等物質，以及參與代謝反應過程的各類酶。通常使用比色法(測定吸光度)或熒光法(測定熒光強度)來進行檢測。
代謝檢測是一種利用化學反應，對生物代謝過程中的各種產物和酶進行檢測的方法。其主要的檢測目標包括糖類、脂質、有機小分子、無機離子、蛋白質等物質，以及參與代謝反應過程的各類酶。通常使用比色法(測定吸光度)或熒光法(測定熒光強度)來進行檢測。
在代謝檢測計算時，通常采用標準曲線法，即用標準物質配制濃度已知的標準系列，在標準條件下，測定各標準樣品的吸光度(或熒光強度)，以吸光度(熒光強度)值(Y)對被測標準物質的濃度(X)建立標準曲線y=f(x)，在同樣的條件下，測定待測樣本的吸光度(熒光強度)，再通過標準曲線計算出濃度。
代謝檢測的結果有兩種主要表現方式：濃度和活性。
01 濃度
對于各種代謝產物的檢測，通常以其濃度來顯示。如測定血清中的過氧化氫濃度時，通過標準樣品顯色建立的標準曲線，方程為y=0.0045x+0.02022(如圖)，測得血清樣本顯色后的吸光度為0.359，則計算出血清樣本中的過氧化氫濃度為：(0.359-0.02022)÷ 0.0045=75.28 mmol/L。
在使用標準曲線法時，使用的標準物質可以是與被檢測的代謝產物相同的物質，也可以是被檢測的代謝產物經過一定的生化反應后以等比例生成的物質。如在檢測血清中過氧化氫(H2O2)濃度時，就使用H2O2試劑配制成已知濃度的標準樣品進行檢測。而在檢測血清中甘油三酯的含量時，一般使用甘油三酯的水解產物甘油作為標準品來進行顯色反應。甘油三酯在檢測實驗過程中以1:1的比例水解生成甘油，因此，通過檢測結果計算出的甘油濃度，即為樣本中甘油三酯的濃度。
02 活性
除了各種物質濃度的檢測外，對于代謝反應過程中各種酶的檢測，其結果通常以活性單位來表示。酶活性的檢測也是代謝檢測特有的檢測方式之一。
酶的活性通常以活性單位(U)表示，不同的酶活性單位具有各自的定義，通常是指該酶在正常生理狀態下，單位時間內消耗反應底物、生成產物的速率。酶活性的檢測，也是通過檢測相關底物或產物濃度的變化速率實現的。如蔗糖酶催化蔗糖水解生成葡萄糖，因此以葡萄糖濃度的升高速率來測定蔗糖酶活性;過氧化氫酶催化過氧化氫分解，因此以過氧化氫濃度的降低速率來測定過氧化氫酶活性。除了同樣使用標準曲線法對底物或產物的濃度進行檢測外，測定酶活時還需特別注意反應時間和反應溫度，且在進行組織樣本測定時，通常會引入總蛋白含量來對樣本處理水平進行校正。
如對大鼠回腸組織的蔗糖酶含量進行測定，其活性單位U的定義為在37°С條件下，每毫克組織蛋白每分鐘水解1 nmol蔗糖。使用葡萄糖作為標準物質，測得吸光度對應葡萄糖濃度(mmol/L)的標準曲線為y = 0.0306 x + 0.0025，在20分鐘的反應時間內，樣本中的蔗糖酶水解底物，使葡萄糖檢測的吸光度由0.079上升至0.204。此外，另測得該樣本中總蛋白濃度為6.48 mgprot/mL，因此該回腸樣本中蔗糖酶的活性為：(0.204–0.079-0.0025)÷0.0306÷20÷6.48×1000=30.89U/mgprot。
需要指出的是，代謝檢測中對酶活性的檢測是在模擬其生理條件下(包括溫度、pH值、離子強度、輔助因子等)對其催化能力的檢測，與構成該酶的分子的物質的量并沒有本質上的關系，因此有可能出現酶的物質的量增加，但活性反而降低的情況。
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