- 產品對比
- 產品描述
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- 商品名稱: Mouse FAS/CD95(Factor Related Apoptosis)ELISA Kit
- 商品編號: E-EL-M3061
- 中文名: 小鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)酶聯免疫吸附測定試劑盒
- 別稱: FASR, TNFRSF6, APO1, APT1, FAS1, FASTM, ALPS1A
- 適應種屬: 小鼠
- 檢測范圍: 0.16~10 ng/mL
- 靈敏度: 0.10 ng/mL
用途
該試劑盒用于體外定量檢測Mouse 血清,血漿或其他生物體液中FAS/CD95濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠FAS/CD95抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的小鼠FAS/CD95會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠FAS/CD95抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠FAS/CD95抗體與結合在包被抗體上的小鼠FAS/CD95結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,FAS/CD95濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中FAS/CD95的濃度。
反應類型 夾心法 規格 96T 反應時間 3.5h 反應性 Mouse 檢測方法 Colormetric 檢測范圍 0.16—10 ng/mL 靈敏度 0.10 ng/mL 樣本體積 100μL 樣本類型 血清,血漿或其他生物體液 特異性
可檢測樣本中的小鼠FAS/CD95,且與其它相關蛋白無明顯交叉反應。
重復性
板內,板間變異系數均<10%。
典型數據
由于實驗操作條件的不同(如操作者、移液技術、洗板技術和穩定條件等),標準曲線的OD值會有所差異。以下數據和曲線僅供參考,實驗者需根據自己的實驗建立標準曲線。
(ng/mL) O.D Average Corrected 10 2.294
2.352.322 2.245 5 1.701
1.7511.726 1.649 2.5 0.918
0.8780.898 0.821 1.25 0.532
0.5520.541 0.465 0.63 0.309
0.2930.301 0.224 0.31 0.2
0.1960.198 0.121 0.16 0.127
0.1390.133 0.056 0 0.069
0.0850.077 -- 精密度
板內精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。Intra-assay Precision Inter-assay Precision Sample 1 2 3 1 2 3 n 20 20 20 20 20 20 Mean
(ng/mL)0.48 1.58 3.65 0.44 1.50 3.93 Standard
deviation0.03 0.06 0.11 0.03 0.08 0.17 C V (%) 5.23 4.04 3.02 6.89 5.64 4.21 回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type Range (%) Average Recovery (%) Serum (n=8) 88-100 94 EDTA plasma (n=8) 86-98 92 Cell culture media (n=8) 87-100 94 線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。
Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5) 1:2 Range (%) 87-100 87-99 91-106 Average (%) 94 93 97 1:4 Range (%) 85-99 86-97 91-106 Average (%) 92 91 97 1:8 Range (%) 85-98 89-104 87-102 Average (%) 90 96 95 1:16 Range (%) 86-101 89-100 89-101 Average (%) 93 94 96 試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒,請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
中文名稱 英文名稱 規格 保存條件 ELISA酶標板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 條 -20℃,可存放6個月 凍干標準品 Reference Standard 2 支 濃縮生物素化抗體(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL 濃縮HRP酶結合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光),可存放6個月 標準品&樣品稀釋液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 2-8℃.可存放6個月 生物素化抗體稀釋液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL 酶結合物稀釋液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL 濃縮洗滌液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL 底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 2-8℃(避光) 反應終止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 2-8℃ 封板覆膜 Plate Sealer 5 張 產品說明書 Product Description 1 份 質檢報告 Certificate of Analysis 1 份 說明:所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染。
試劑體積以實際發貨版說明書為準。相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些,請在使用時量取而非直接倒出。試驗所需自備物品
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1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
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2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
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3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
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4. 吸水紙
操作步驟
1. 對應板孔中加入100μL標準品工作液或樣本,37℃孵育90分鐘 2. 棄掉板內液體后,立即加入100μL生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘 3. 棄掉板內液體,洗板3次 4. 每孔加入100μL HRP酶結合物工作液,37℃孵育30分鐘,棄掉板內液體,洗板5次 5. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分鐘左右 6. 每孔加入50μL終止液 7. 立即在450nm波長下讀數,處理數據
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