- 產(chǎn)品對(duì)比
- 產(chǎn)品描述
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- 商品名稱: fT4(Free Thyroxine) ELISA Kit
- 商品編號(hào): E-EL-0122c
- 中文名: 游離甲狀腺素(fT4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
- 別稱: fT4
- 適應(yīng)種屬: 人
- 檢測(cè)范圍: 1.56~100 pg/mL
- 靈敏度: 0.94 pg/mL
用途
該試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中fT4濃度。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。用fT4抗原包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的fT4與包被的fT4競(jìng)爭(zhēng)生物素標(biāo)記的抗fT4單抗上的結(jié)合位點(diǎn),游離的成分被洗去。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素,生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,fT4濃度與OD450值之間呈反比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中fT4的濃度。
反應(yīng)類型 競(jìng)爭(zhēng)法 規(guī)格 96T 反應(yīng)時(shí)間 2.0h 反應(yīng)性 通用 檢測(cè)方法 Colormetric 檢測(cè)范圍 1.56-100 pg/mL 靈敏度 0.94 pg/mL 樣本體積 50μL 樣本類型 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 特異性
可檢測(cè)樣本中的fT4,且與其它相關(guān)蛋白無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(pg/mL) O.D Average 100 0.39
0.4160.403 50 0.511
0.5110.511 25 0.712
0.6960.704 12.5 1
1.0161.008 6.25 1.409
1.3851.397 3.13 1.785
1.7751.78 1.56 2.066
2.0842.075 0 2.453
2.4692.461 精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測(cè)20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測(cè)20次。
Intra-assay Precision Inter-assay Precision Sample 1 2 3 1 2 3 n 20 20 20 20 20 20 Mean
(pg/mL)5.10 11.00 44.20 5.20 11.00 45.00 Standard
deviation0.30 0.50 2.30 0.30 0.50 2.00 C V (%) 5.88 4.55 5.20 5.77 4.55 4.44 回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type Range (%) Average Recovery (%) Serum (n=8) 92-106 99 EDTA plasma (n=8) 90-101 96 Cell culture media (n=8) 96-107 102 線性
分別往5個(gè)樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。將5個(gè)樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。
Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5) 1:2 Range (%) 87-101 99-112 91-104 Average (%) 93 106 98 1:4 Range (%) 85-96 92-108 92-105 Average (%) 90 98 100 1:8 Range (%) 88-104 85-98 94-109 Average (%) 95 92 101 1:16 Range (%) 89-106 87-99 96-111 Average (%) 97 94 103 試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒,請(qǐng)拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
中文名稱 英文名稱 規(guī)格 保存條件 ELISA酶標(biāo)板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 條 -20℃,可存放6個(gè)月 凍干標(biāo)準(zhǔn)品 Reference Standard 2支 濃縮生物素化抗體(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL 濃縮HRP酶結(jié)合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光),可存放6個(gè)月 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 2-8℃.可存放6個(gè)月 生物素化抗體稀釋液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL 酶結(jié)合物稀釋液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL 濃縮洗滌液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL 底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 2-8℃(避光) 反應(yīng)終止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 2-8℃ 封板覆膜 Plate Sealer 5 張 產(chǎn)品說(shuō)明書 Product Description 1 份 質(zhì)檢報(bào)告 Certificate of Analysis 1 份 說(shuō)明:所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。
試劑體積以實(shí)際發(fā)貨版說(shuō)明書為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時(shí)會(huì)比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些,請(qǐng)?jiān)谑褂脮r(shí)量取而非直接倒出。試驗(yàn)所需自備物品
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1.酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)
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2.高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
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3.37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
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4.吸水紙
操作步驟
1. 對(duì)應(yīng)板孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品工作液或樣本后,立即每孔加入50μL生物素化抗體工作液,37℃孵育45分鐘 2. 棄掉板內(nèi)液體,洗板3次 3. 每孔加入100μL HRP酶結(jié)合物工作液,37℃孵育30分鐘,棄掉板內(nèi)液體,洗板5次 4. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分鐘左右 5. 每孔加入50μL終止液 6. 立即在450nm波長(zhǎng)下讀數(shù),處理數(shù)據(jù)
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