本公司產品僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
- 產品對比
- 產品描述
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- 商品名稱: Human TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit
- 商品編號: E-EL-H0109c
- 中文名: 人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫吸附測定試劑盒
- 別稱: DIF, TNF-alpha, TNFA, TNFSF2
- 適應種屬: 人
- 檢測范圍: 7.81~500 pg/mL
- 靈敏度: 4.69 pg/mL
用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中TNF-α濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人TNF-α抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人TNF-α會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-α抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人TNF-α抗體與結合在包被抗體上的人TNF-α結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中TNF-α的濃度。
反應類型 夾心法 規格 96T 反應時間 3.5h 反應性 Human 檢測方法 Colormetric 檢測范圍 7.81—500 pg/mL 靈敏度 4.69 pg/mL 樣本體積 100μL 樣本類型 血清，血漿或其他生物體液 特異性
可檢測樣本中的人TNF-α，且與其它相關蛋白無明顯交叉反應。
重復性
板內，板間變異系數均<10%。
典型數據
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術、洗板技術和穩定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗建立標準曲線。
(pg/mL) O.D Average Corrected 500 2.427
2.4452.436 2.376 250 1.562
1.5841.573 1.513 125 0.993
0.9790.986 0.926 62.5 0.477
0.5150.496 0.436 31.25 0.245
0.2370.241 0.181 15.63 0.166
0.160.163 0.103 7.81 0.105
0.1210.113 0.053 0 0.059
0.0610.06 -- 
精密度
板內精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。Intra-assay Precision Inter-assay Precision Sample 1 2 3 1 2 3 n 20 20 20 20 20 20 Mean
(pg/mL)24.10 79.50 183.00 22.70 86.50 177.40 Standard
deviation1.50 3.80 9.70 1.20 4.00 7.60 C V (%) 6.22 4.78 5.30 5.29 4.62 4.28 回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type Range (%) Average Recovery (%) Serum (n=8) 86-100 92 EDTA plasma (n=8) 94-106 99 Cell culture media (n=8) 93-107 99 線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5) 1:2 Range (%) 92-105 84-97 88-99 Average (%) 99 91 93 1:4 Range (%) 99-116 87-99 91-104 Average (%) 107 93 98 1:8 Range (%) 97-113 81-93 92-109 Average (%) 104 88 99 1:16 Range (%) 96-112 85-98 95-107 Average (%) 103 90 100 試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
中文名稱 英文名稱 規格 保存條件 ELISA酶標板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 條 -20℃，可存放6個月 凍干標準品 Reference Standard 2 支 濃縮生物素化抗體(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL 濃縮HRP酶結合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光)，可存放6個月 標準品&樣品稀釋液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 2-8℃.可存放6個月 生物素化抗體稀釋液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL 酶結合物稀釋液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL 濃縮洗滌液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL 底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 2-8℃(避光) 反應終止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 2-8℃ 封板覆膜 Plate Sealer 5 張 產品說明書 Product Description 1 份 質檢報告 Certificate of Analysis 1 份 說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染。
試劑體積以實際發貨版說明書為準。相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出。試驗所需自備物品
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1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
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2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
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3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
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4. 吸水紙
操作步驟
1. 對應板孔中加入100μL標準品工作液或樣本，37℃孵育90分鐘 
2. 棄掉板內液體后，立即加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘 
3. 棄掉板內液體，洗板3次 
4. 每孔加入100μL HRP酶結合物工作液，37℃孵育30分鐘，棄掉板內液體，洗板5次 
5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右 
6. 每孔加入50μL終止液 
7. 立即在450nm波長下讀數，處理數據
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