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Human NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit

產(chǎn)品貨號：

E-EL-H6127

中文名：

人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

別稱：

LCN2, Lipocalin 2, Oncogene 24p3, MSFI

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所屬分類：

零售價

￥ 3200

市場價

￥ 3200

規(guī)格
- 48T
- 96T
- 96T*5

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產(chǎn)品描述

商品名稱: Human NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit
商品編號: E-EL-H6127
中文名: 人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
別稱: LCN2, Lipocalin 2, Oncogene 24p3, MSFI
適應(yīng)種屬: 人
檢測范圍: 31.25~2000 pg/mL
靈敏度: 18.75 pg/mL

用途

　　該試劑盒用于體外定量檢測Human 血漿或其他生物體液中NGAL濃度

檢測原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人NGAL抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人NGAL會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人NGAL抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人NGAL抗體與結(jié)合在包被抗體上的人NGAL結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，NGAL濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中NGAL的濃度。

反應(yīng)類型	夾心法
規(guī)格	96T
反應(yīng)時間	3.5h
反應(yīng)性	Human
檢測方法	Colormetric
檢測范圍	31.25—2000 pg/mL
靈敏度	18.75 pg/mL
樣本體積	100μL
樣本類型	血漿或其他生物體液

特異性

　　可檢測樣本中的人NGAL，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。

重復(fù)性

　　板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。

典型數(shù)據(jù)

　　由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(pg/mL)	O.D	Average	Corrected
2000	2.501 2.517	2.509	2.42
1000	1.601 1.643	1.622	1.533
500	0.992 0.97	0.981	0.892
250	0.54 0.552	0.546	0.457
125	0.288 0.284	0.286	0.197
62.5	0.201 0.185	0.193	0.104
31.25	0.147 0.165	0.156	0.067
0	0.09 0.087	0.089	--

精密度

　　板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
　　板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。

	Intra-assay Precision			Inter-assay Precision
Sample	1	2	3	1	2	3
n	20	20	20	20	20	20
Mean (pg/mL)	98.11	250.16	953.57	107.72	251.70	944.02
Standard deviation	5.69	10.06	45.01	6.16	11.68	51.45
C V (%)	5.80	4.02	4.72	5.72	4.64	5.45

回收率

　　分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。

Sample Type	Range (%)	Average Recovery (%)
Serum (n=8)	94-109	100
EDTA plasma (n=8)	88-101	94
Cell culture media (n=8)	95-109	102

線性

　　分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。

		Serum (n=5)	EDTA plasma (n=5)	Cell culture media (n=5)
1:2	Range (%)	89-102	95-107	87-101
1:2	Average (%)	97	101	94
1:4	Range (%)	89-105	99-113	85-95
1:4	Average (%)	96	104	90
1:8	Range (%)	88-101	97-111	90-105
1:8	Average (%)	95	104	97
1:16	Range (%)	88-101	96-112	90-102
1:16	Average (%)	95	103	95

試劑盒組成及保存

　　未拆封的試劑盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。

中文名稱	英文名稱	規(guī)格	保存條件
ELISA酶標(biāo)板(可拆卸)	Micro ELISA Plate(Dismountable)	8 孔×12 條	-20℃，可存放6個月
凍干標(biāo)準(zhǔn)品	Reference Standard	2 支
濃縮生物素化抗體(100×)	Concentrated Biotinylated Detection Ab	1支 120 μL
濃縮HRP酶結(jié)合物(100×)	Concentrated HRP Conjugate	1支 120 μL	-20℃(避光)，可存放6個月
標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液	Reference Standard & Sample Diluent	1瓶 20 mL	2-8℃.可存放6個月
生物素化抗體稀釋液	Biotinylated Detection Ab Diluent	1瓶 14 mL
酶結(jié)合物稀釋液	HRP Conjugate Diluent	1瓶 14 mL
濃縮洗滌液(25×)	Concentrated Wash Buffer (25×)	1瓶 30 mL
底物溶液(TMB)	Substrate Reagent	1瓶 10 mL	2-8℃(避光)
反應(yīng)終止液	Stop Solution	1瓶 10 mL	2-8℃
封板覆膜	Plate Sealer	5 張
產(chǎn)品說明書	Product Description	1 份
質(zhì)檢報告	Certificate of Analysis	1 份

　　說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。
　　試劑體積以實際發(fā)貨版說明書為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出。

試驗所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙

操作步驟

	1. 對應(yīng)板孔中加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品工作液或樣本，37℃孵育90分鐘
	2. 棄掉板內(nèi)液體后，立即加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘
	3. 棄掉板內(nèi)液體，洗板3次
	4. 每孔加入100μL HRP酶結(jié)合物工作液，37℃孵育30分鐘，棄掉板內(nèi)液體，洗板5次
	5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右
	6. 每孔加入50μL終止液
	7. 立即在450nm波長下讀數(shù)，處理數(shù)據(jù)