- 產(chǎn)品對比
- 產(chǎn)品描述
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- 商品名稱: Human NOS2/iNOS(Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit
- 商品編號: E-EL-H0753c
- 中文名: 人誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
- 別稱: NOS2A, HEP-NOS, I-NOS
- 適應(yīng)種屬: 人
- 檢測范圍: 78.13~5000 pg/mL
- 靈敏度: 46.88 pg/mL
用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中NOS2/iNOS濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人NOS2/iNOS抗體包被于酶標(biāo)板上,實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人NOS2/iNOS會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人NOS2/iNOS抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人NOS2/iNOS抗體與結(jié)合在包被抗體上的人NOS2/iNOS結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,NOS2/iNOS濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中NOS2/iNOS的濃度。
反應(yīng)類型 夾心法 規(guī)格 96T 反應(yīng)時間 3.5h 反應(yīng)性 Human 檢測方法 Colormetric 檢測范圍 78.13—5000 pg/mL 靈敏度 46.88 pg/mL 樣本體積 100μL 樣本類型 血清,血漿或其他生物體液 特異性
可檢測樣本中的人NOS2/iNOS,且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(pg/mL) O.D Average Corrected 5000 2.523
2.5352.529 2.459 2500 1.766
1.7741.77 1.7 1250 1.02
0.9841.002 0.932 625 0.514
0.5240.519 0.449 312.5 0.304
0.2960.3 0.23 156.25 0.192
0.1680.18 0.11 78.13 0.121
0.1310.126 0.056 0 0.065
0.0750.070 -- 精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。Intra-assay Precision Inter-assay Precision Sample 1 2 3 1 2 3 n 20 20 20 20 20 20 Mean
(pg/mL)276.20 441.40 2054.00 265.80 481.50 2256.90 Standard
deviation14.10 24.70 71.90 17.30 26.50 92.50 C V (%) 5.10 5.60 3.50 6.51 5.50 4.10 回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type Range (%) Average Recovery (%) Serum (n=8) 95-108 101 EDTA plasma (n=8) 94-107 99 Cell culture media (n=8) 85-95 90 線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。
Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5) 1:2 Range (%) 93-106 96-112 89-103 Average (%) 100 103 95 1:4 Range (%) 101-118 82-94 94-105 Average (%) 108 89 100 1:8 Range (%) 100-115 82-94 97-112 Average (%) 106 87 102 1:16 Range (%) 97-107 79-91 93-106 Average (%) 102 86 99 試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒,請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
中文名稱 英文名稱 規(guī)格 保存條件 ELISA酶標(biāo)板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 條 -20℃,可存放6個月 凍干標(biāo)準(zhǔn)品 Reference Standard 2 支 濃縮生物素化抗體(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL 濃縮HRP酶結(jié)合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光),可存放6個月 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 2-8℃.可存放6個月 生物素化抗體稀釋液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL 酶結(jié)合物稀釋液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL 濃縮洗滌液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL 底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 2-8℃(避光) 反應(yīng)終止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 2-8℃ 封板覆膜 Plate Sealer 5 張 產(chǎn)品說明書 Product Description 1 份 質(zhì)檢報告 Certificate of Analysis 1 份 說明:所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。
試劑體積以實際發(fā)貨版說明書為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些,請在使用時量取而非直接倒出。試驗所需自備物品
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1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
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2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
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3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
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4. 吸水紙
操作步驟
1. 對應(yīng)板孔中加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品工作液或樣本,37℃孵育90分鐘 2. 棄掉板內(nèi)液體后,立即加入100μL生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘 3. 棄掉板內(nèi)液體,洗板3次 4. 每孔加入100μL HRP酶結(jié)合物工作液,37℃孵育30分鐘,棄掉板內(nèi)液體,洗板5次 5. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分鐘左右 6. 每孔加入50μL終止液 7. 立即在450nm波長下讀數(shù),處理數(shù)據(jù)
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