
生物素標(biāo)記試劑盒的原理是活化的生物素的酯鍵和被標(biāo)記物上的氨基脫水縮合形成穩(wěn)定的酰胺鍵。此外,還可以標(biāo)記蛋白的N末端。如果蛋白上有伯胺,比如賴氨酸就是可以標(biāo)記的。

試劑盒檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本的實(shí)際濃度情況。如果是常規(guī)樣本類型,可以咨詢ELISA技術(shù)支持以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù)并安排預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。
如果樣品中待測(cè)物濃度過高或過低,請(qǐng)對(duì)樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s。如果樣本中的分析物濃度遠(yuǎn)低于試劑盒的最低檢測(cè)線,建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測(cè)。

組織樣本:組織研磨后,將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,然后置于30℃水浴鍋中輕微振蕩使其迅速融化,此操作反復(fù)1-2次即可。
細(xì)胞樣本:按上述反復(fù)凍融的操作反復(fù)2-3次。若為膜蛋白可以適當(dāng)超聲一下,但需要控制好超聲的溫度、頻率。
樣本中建議提前加入蛋白酶抑制劑。常規(guī)推薦:PMSF。

溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外,如機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、低溫冷凍等均可引起溶血。為避免溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,請(qǐng):
(1)靜脈采血時(shí),回抽壓力不宜過大
(2)一次性采血量不宜過少
(3)采集的全血不宜激烈振蕩
(4)離心轉(zhuǎn)速不宜過大
(5)收集的全血需盡快處理成血清/血漿,全血不能凍融
(6)若需要麻醉采血,需使用沒有溶血作用的麻醉劑

目前我們的試劑盒檢測(cè)的種屬主要為人,小鼠和大鼠,小部分指標(biāo)涉及猴,兔,豬和雞等特殊種屬。對(duì)于那些命名中帶有特定物種名稱的試劑盒(如人)是專門針對(duì)此物種的。如果說明書中沒有指明物種,該試劑盒即在常規(guī)哺乳動(dòng)物種屬內(nèi)是通用的。其他特殊種屬的檢測(cè)適用性請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)。

96T試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品&樣本均不做復(fù)孔,最多檢測(cè)88個(gè)樣本;標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔,樣本做單孔,最多檢測(cè)80個(gè)樣本;標(biāo)準(zhǔn)品做單孔,樣本做復(fù)孔,最多檢測(cè)44個(gè)樣本;標(biāo)準(zhǔn)品&樣本均做復(fù)孔,最多檢測(cè)40個(gè)樣本。如果做3復(fù)孔,檢測(cè)的樣本數(shù)量會(huì)相應(yīng)減少。
為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,我們建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做復(fù)孔,但是并不是要求ELISA實(shí)驗(yàn)一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔,客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實(shí)驗(yàn)。

為保證結(jié)果的準(zhǔn)確度,不建議減少標(biāo)曲的孔數(shù),請(qǐng)至少保證檢測(cè) 6 個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)品濃度(含空白孔 )。


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